孔维顺山东省医院
结核君——结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，俗称结核杆菌，是由德国著名医学家、细菌学家罗伯特·科赫于年最早发现。
罗伯特·科赫于
结核分枝杆菌分为人型和牛型，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。人类与结核病的战斗持续了几千年，可至今为止结核杆菌仍然没有彻底消灭，世界上有些国家或地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势，呈现出灰复燃的现象，如今已成为所有传染病中的最大死亡原因。根据世界卫生组织的最新报告，年全球约有万新发肺结核病例，万人死于肺结核；中国结核病估计新发病例数达91.8万例，仅次于印度和印度尼西亚，居全球第3位。可见，肺结核仍然是我们当前面临的重大公共卫生问题之一，因此，了解它的生物学性状、实验室检查方法是检验工作者需要掌握的内容。
1、结核君的生物学性状
结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～4X0.4um。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸(mycolicacid)包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼（Ziehl-Neelsen)抗酸染色法，染色后分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。培养特性：专性需氧。最适温度为37C，低于30C不生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。常用的培养基有罗氏（Lowenstein-Jensen）固体培养基，内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感，在70%乙醇中2min死亡。此外，脂质可防止菌体水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘埃上保持传染性8～10d，在干燥痰内可存活6～8个月。结核分枝杆菌对湿热敏感，在液体中加热62～63℃15min或煮沸即被杀死。结核分枝杆菌对紫外线敏感。直接日光照射数小时可被杀死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒。
2、结核君的实验室检查方法
直接涂片镜检
选择患者痰夜、脑脊液、胸腹水或者可以分泌物、脓性分泌物等直接涂片或集菌后涂片，用抗酸染色。若找到抗酸阳性菌即可初步诊断。也可用金胺染色，在荧光显微镜下结核分枝杆菌呈显金黄色荧光。
浓缩集菌
选择患者痰夜、脑脊液、胸腹水或者可以分泌物、脓性分泌物直接离心沉淀集菌。
分离培养
将经中和集菌材料接种于固体培养基，器皿口加橡皮塞于37℃培养，每周观察1次。结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2～4周长成肉眼可见的落菌。液体培养可将集菌材料滴加于含血清的培养液，则可于1～2周在管底见有颗粒生长。取沉淀物作涂片，能快速获得结果，并可进一步作生化、药敏等测定和区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。中国学者已证明结核分枝杆菌L型可存在于血细胞内或粘附于细胞表面。这种患者往往血沉加快，用低渗盐水溶血后立即接种高渗结核分枝杆菌L型培养基能提高培养阳性率。
PCR检测结核杆菌
应用聚合酶链反应(PCR)技术检测结核分枝杆菌，能大大提供结核分枝杆菌的检出率和检出特异性，有利于临床及时治疗。标本采自患者的痰、支气管分泌物、脑脊液、心包积液、胸腔积液、胸腹水等，每ml中只需含几个细菌即可获得阳性结果，操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又细菌L型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出DNA，以致造成PCR假阴性。用组织磨碎器充分研磨使细胞破裂后，则可出现阳性。有条件的单位使用BACTEC法，以含14C棕榈酸作碳源底物的7H12培养基，测量在细菌代谢过程中所产生的14C量推算出标本中是否有抗酸杆菌，5～7d就可出报告。
结核抗体的快速诊断（胶体金法）
结核菌感染和发病的生物学过程可分为起始期、T细胞反应期、共生期和细胞外繁殖传播期。在T细胞反应期，结核菌在巨噬细胞内的最初生长，形成中心呈固态干酪坏死的结核灶，它能限制结核菌继续复制。由T细胞介导的细胞免疫(cell mediatedimmunity，CMI)和迟发性变态反应(delaytypehyperensitivity，DTH)在此形成，机体可产生特异性抗体，一般产生相应的IgG和IgM抗体，但是以IgG抗体为主，这是由于结核分枝杆菌的细胞壁重要组成成分是阿拉伯糖甘露糖脂（LAM），LAM主要分布于细胞壁表面，组成成分为碳水化合物，主要生物学活性为具有抗原性、抑制T淋巴细胞增殖、破坏巨噬细胞的干扰、清除有毒的自由基、抑制蛋白激酶的活性。因此，抗LAM抗体是诊断结核病的重要标志之一。结核抗体监测特异性不高，结果只有参考价值，要结合临床进行诊断。
